< 讲座回顾 - Fluidigm质谱流式技术应对新冠病毒研究挑战

        Fluidigm中国于2020年4月29日举办了“直击COVID-19 – Fluidigm质谱流式技术应对新冠病毒研究挑战”的在线讲座,Fluidigm质谱流式应用专家韩晖博士为大家详细介绍了Fluidigm质谱流式技术特点以及在新冠病毒研究中的应用进展。与会者对于质谱流式技术强大的数据获取能力以及在新冠研究中的应用突破表示了极大的兴趣。讲座结束之后,大家热情不减,纷纷向韩晖老师提问,希望能够更加深入了解质谱流式技术及其应用前景。

        鉴于讲座时间有限,现场还有很多问题未能回复。在此,我们整理了一些比较有代表性的问题为大家进行解答:

Q: 韩博士,您好。请问质谱流式可以检测RNA吗?
A:质谱流式是可以做RNA检测的。从2016年至今已有4篇相关文献发表,其中有两篇是发表在《Nature Protocol》的。如果您感兴趣,可点击此处留下您的联系方式索取相关文献。

Q: 请问质谱流式检测这么多通道,不会串色吗?
A:传统流式细胞技术以荧光基团作为待测抗体的标记物,受限于荧光发射光谱相对较宽,在检测过程中特别是多参数检测过程中势必难以突破荧光重叠的瓶颈,产生串色。而质谱流式技术采用非放射性的重金属同位素作为抗体的标签,以ICP质谱对金属标签的原子量进行检测。ICP质谱超高的分辨能力可以完全区分开用于标记的金属元素,因而可以极大的改善串色的情况,尤其是在多通道检测中具有很大的优势。

Q:和单细胞测序相比,质谱流式有什么优点呢?
A:单细胞测序和质谱流式都是目前非常强大的技术,越来越多的高分文献都是将两者结合使用,没有优劣之分。区别在于检测目标不一样,单细胞测序主要是对RNA进行检测,而质谱流式是对蛋白进行检测。单细胞测序时有可能会漏掉某些丰度很低但功能又很重要的RNA。质谱流式检测可以指定蛋白,避免漏掉丰度很低但又很重要的蛋白,在这方面对单细胞测序是一个很好的补充。此外,单细胞测序所涉及到的细胞数量相对于质谱流式来说少很多,这样很容易漏掉罕见亚群。质谱流式也可以很好的补充这一点。

Q:质谱流式能做外泌体研究吗?
A:现在暂时还没有相关研究发表,但是目前有很多国内外专家都在对这个研究方向进行讨论。2019年底,有一篇应用质谱流式技术对突触小体进行研究的文献发表在《Journal of Neuroscience》,基于突触小体与外泌体有很大的相似性,将质谱流式技术应用于外泌体研究也是一个可行的研究方向。

Q:  佑安医院的文献中MSC的治疗方案是什么样的?
A:佑安医院是将MSC重悬在100毫升的生理盐水中,以1x106 /kg 的细胞量对患者进行注射,14天之后抽取外周血检测免疫亚群。

Q:请问CyTOF做动物样本多吗,是不是做临床更有意义呢?
A:质谱流式技术(CyTOF)在初期大部分是应用于人的样本检测。在2018年之后,随着质谱流式技术的普及,越来越引起科研界的重视,做动物样本的也开始逐渐增多。因此目前动物样本和临床样本都有非常多的应用案例。

Q:CyTOF在临床试验中的应用多吗?
A:随着质谱流式技术(CyTOF)的普及,临床上的研究应用也越来越多。在Clinical Trails上查到中国有两个项目在招募志愿者。全球来说有很多相关临床案例可供参考。

Q:组织成像质谱流式用的切片是冰冻切片吗?是不是组织也能做。
A:组织成像质谱流式支持组织样本检测,所用的切片可以是冰冻切片,也可以是石蜡包埋切片。

Q:组织成像质谱可以自动区分细胞类型吗?
A:是的,组织成像质谱流式结合后续算法分析,可以自动区分细胞类型。

Q:MDIPA是否可以分析Th和Treg细胞亚群?
A:可以。在Summary Page中会显示Th和Treg亚群的细胞数量及在其母群和总细胞中的占比。

Q:使用Maxpar试剂盒联合我们感兴趣的指标时,我们后加进去的Biomarker需要摸条件吗?
A:我们公司会提供一个推荐的抗体浓度,您可以按照这个推荐浓度去做。但如果想要得到最佳效果的话,还是建议您摸一下条件,以便找到一个最合适的抗体浓度。

Q:如果我已有一些传统流式的研究目标,主要针对CD4+, CD8+的,CyTOF的Panel怎么设计呢?
A:您可以根据您所研究的T细胞进行marker的选择,这方面有比较多的文献可供参考。我们公司针对T细胞也有相关的Standard Kit,也可供您参考。

Q:金属标记试剂盒可以标记抗体外的蛋白复合物吗?
A:这个公司没有进行测试,但是理论上是有可行性的,我们公众号发表的关于病毒领域的研究软文中就提到了一个应用,多肽-MHC技术和质谱流式联用,其中就是对多肽进行了金属标记。(点此关注Fluidigm微信公众号,搜索《质谱流式在虫媒病毒和疱疹病毒中应用举例》)如果真的感兴趣,可以点击此处留下您的联系方式,我们一起探讨一下实验方案。

Q:质谱流式技术对染色抗体有特殊要求吗?抗体会不会很难买?
A:质谱流式技术的抗体系统是开放的。您可以购买市面上任何适用于流式的裸抗,与我们的金属标签进行搭配之后就可以进行染色了。除此之外,Fluidigm也提供一些预标记的抗体,如果您有兴趣的话,可以点击此处留下您的联系方式,我们的工作人员会给您发送相关资料。

Q:质谱流式所用的样本能够做冻存吗?
A:质谱流式所用的样本是可以冻存的,对抗体进行标记和染色之后,把样本重悬在10%的DMSO+90%的FBS里面,放置-80冰箱就可以了。如果是未固定的样本,需要冻存在液氮中。

Q:全血即PBMC样品是否可以长途运输送到外地实验室去测样,有什么需要注意的地方?运送条件苛刻吗?
A:可以运输。将标记好的样本冻存后,放置于干冰中进行运输即可。

Q:如果样品不能一次收集全,分批如何操作呢?
A:分批次收集的话,将每个批次收集好样本后按照常规细胞系的冻存方法冻存到液氮中,等积攒到足够的细胞量,一起复苏出来进行实验。

Q:检测对全血稳定性有要求吗?比如是否必须在多长时间内检测?
A:全血推荐室温避光缓慢旋转保存,12小时内进行下一步操作。

Q:请问如果在Maxpar Direct Immune Profile Kit中加入自选抗体,还可以用配套的分析平台分析吗?
A:可以的。Fluidigm质谱流式的分析平台有一个develop mode,在这个mode中可以加入自选的marker,并对marker进行圈门设定之后就可以进行分析。

Q:如果不买MDIPA试剂盒,软件可以单独购买吗?
A:软件可以单独购买,但是这个软件只支持MDIPA试剂盒,无法应用于其他数据分析。

Q:MDIPA试剂盒的价格是多少?
A:您可点击此处留下您的联系方式,我们的销售人员会与您取得联系。

Q:你们提供检测服务吗?
A:目前Fluidigm暂时不提供检测服务。您可以点击此处留下您的联系方式,我们会为您介绍国内提供质谱流式检测服务的服务商。

Q:贵公司除了仪器及试剂的销售,是否还提供质谱流式的技术服务?
A:目前Fluidigm以仪器及试剂销售为主。同时我们提供对质谱流式抗体进行金属标记的服务。

Q:请问是否能提供贵公司的联系方式?
A:感谢您对Fluidigm产品和技术的关注。您可致电021-32558368或发邮件至:info-china@fluidigm.com,提出您的需求,我们的工作人员会为您提供相应支持。您亦可访问我们的官网www.fluidigm.com.cn,或关注我们的微信公众号,及时获取最新产品及行业资讯,或点击此处留下您的联系方式,我们的工作人员会尽快与您取得联系。

点击此处可以观看讲座回放。

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